In questa nuova avventura il super cattivo Gru, divenuto un agente dell'Anti-Villain League, non sarà accompagnato solo sua moglie Lucy e dalle loro tre figlie adottive, Margo, Edith e Agnes, ma anche da un nuovo membro in famiglia: Gru Jr., figlio naturale di Gru e Lucy, il cui passatempo preferito è tormentare suo padre. I protagonisti saranno presi di mira da un temibile criminale il fuga, Maxime Le Mal e dalla sua fidanzata, la femme fatale Valentina.